Flekker og misfarging reaksjon




bakterier er delvis transparente, og er laget av et gjennomsiktig materiale protoplasmiske brytning som er litt forskjellig fra det medium hvori de vokser. Det er vanskelig å observere bakterier i var plettfrie, bortsett fra når du bruker spesielle metoder for belysning, for å se dem i skinnende rent. Flekkene er nyttige for de følgende årsaker.
Det gjør mikroskopiske gjenstander semitransparent synlig

  • For å studere den form og størrelse
  • For å påvise nærvær av forskjellige interne og eksterne strukturer
  • For å produsere spesifikke kjemiske og fysiske reaksjoner

Begrepet flekken og fargestoff er ikke det samme. Et fargestoff som brukes for generelle formål kalles et fargestoff. En som brukes for biologiske formål er referert til som en flekk. I henhold til deres kjemiske oppførsel, er de farger som er klassifisert som sure, basiske og nøytrale. En syre fargestoff (eller anion) har en negativ ladning. f.eks., eosin, Rose Bengal og magenta surt. De negativt ladede grupper er karboksyl (COOH) og fenoliske hydroksyl (OH). Siden de er negativt ladet, de bindes til cellulære strukturer positivt ladede. pH-verdien spiller en viktig rolle for effektiviteten av fargingen, fordi arten og graden av ladningen på cellulære komponenter endres med pH. Det anioniske fargestoffer fargen bedre under sure betingelser, hvor proteiner og mange andre molekyler bærer en positiv ladning.



En grunnleggende fargestoff (eller kationisk) bærer en positiv ladning. f.eks., metylenblått, basiske fuksin, krystallfiolett, malakittgrønt, safranin. basiske fargestoffer som binder seg til molekyler slik som nukleinsyre og mange negativt ladede proteiner. Siden de bakterielle celleoverflatene er negativt ladet, blir basiske fargestoffer som oftest brukt i bakteriologi. Grunnleggende fargestoffer er vanligvis tilgjengelig som klorid salter. Et nøytralt fargestoff er et komplekst salt av en syre fargestoffbasert fargestoff. Fargestoffer som brukes i bakteriologi har to egenskaper til felles. Har chromophore grupper, grupper med dobbeltbindinger, som gir fargestoff farge De kan binde med ion celler, kovalent binding eller hydrofobe.
Forholdet mellom type fargestoff og dens ladning når den blir dissosiert til summarized.Organic ioner (grunnleggende fargestoff)

positiv farging prosedyre, et punkt som har en positiv ladning kromofor (den fargede delen av flekken molekyl) blir tiltrukket til den negativt ladede ytre overflate av mikrobiell celle. En flekk så som metylen blå blå har en positivt ladet del av molekylet som flekker mikroorganismen. Negative fargingsprosedyrer, er en kromofor negativ ladning avvist av negativt ladede mikroorganismer, noe som resulterer i negativ farging eller indirekte mikrobiell celle. Nigrosine og porselen blir ofte anvendt for negativ farging av mikrobielle celler, og denne type flekker er spesielt nyttig for visualisering av visse konstruksjoner slik som kapsler som omgir noen bakterieceller.
Flekkene blir generelt fremstilt i hovedsak som vandige oppløsninger. Men i noen tilfeller stamløsninger blir fremstilt i alkohol, og fortynnes med vann om nødvendig. Siden alkohol fjerner flekker, bør de ikke brukes rene alkohol løsninger. Farging løsninger er forberedt på å inneholde lave konsentrasjoner av flekker sjelden overstiger 1%. en aktivitet meget fortynnet fargestoff løsning for en lengre periode vil gi mye bedre resultater da en mer konsentrert løsning fungerer for et kortere intervall. Denne prosedyren må følges for å avsløre interne strukturen i bakterier.

Interaksjonen av en celle med anti-flekkmidler re- negativ og positiv: det ytre lag av en celle er negativt ladet, og en positiv flekk blir tiltrukket av cellen, mens en negativ farging er avslått.

Coloring bemerker tolkning reaksjoner
Når pH-verdien for omgivelsene i de mikrobielle celler i en nøytral eller alkalisk måte, alle mikrobielle celler har en negativ ladning på deres overflate, idet overflateladning. Mange bakteriekulturer enkel farge produsere syrer, og dermed legge til hydrogenioner vei til et kulturmedium og avtagende pH. Disse hydrogenioner (H +) kommuniserer med overflaten av de negative ladninger på overflaten. Når dette skjer, celleoverflaten sterkere tiltrekker positivt ladede ioner fargestoff (grunnleggende fargestoffer). Så mikrober fra dårlige syre flekken miljøer med grunnleggende fargestoffer. Av denne grunn er de basiske fargestoffer utgjøres av alkaliske oppløsninger. For eksempel er kaliumhydroksid (KOH) tilsatt til metylenblått løsninger for å danne det sted kalt metylenblått Loeffler.
Noen bakterier utskiller alkaliske materialer i løpet av veksten, og dette reduserer antallet av tilgjengelige hydrogenioner i kulturmediet. Under slike forhold har celleoverflate en større negativ ladning, noe som gjør det mer attraktivt for grunnleggende og derfor fargestoffer som gir større binding, og gjennomtrengning av mikroben indre farging. mikroorganismer fargestoffer flekk av beste basen i nøytrale eller alkaliske forhold.

Hvis bunnen av fargestoffmolekylet har en negativ ladning, blir den avvist av den negativt ladede overflaten av cellen. Således negativt ladede fargestoffer som ikke bindes til celleoverflaten, og heller ikke er i stand til å trenge inn i cellen. Disse kalles syre fargestoffer. Metodikken for bruk av sure fargestoffer er forskjellig fra de basiske fargestoffer. En syre fargestoff blandes med en dråpe av kultur smurt på et objektglass og tillatt å lufttørke. De negativt ladede celler, ikke er farget av fargestoffet negativt ladet, og fremstår som tydelig et område omgitt av et område av ny farge. fargestoffer negativ ladning brukes på denne måten kalles negative flekker. I nøytrale eller alkaliske forhold, de negative flekker (syre fargestoffer) fungere bedre, fordi disse forholdene tillater overflateladningen til å være mer negativ. negative flekker er av begrenset nytte for de som bruker lysmikroskoper, men kan brukes for å unngå noen av ulempene ved farging med basiske fargestoffer.

enkel farging

En enkel fargestoff oppløsning, inneholder bare en flekk, som oppløses i et løsningsmiddel. Det gjelder mikroorganismen i ett program. Mikroorganismer gi den karakteristiske fargen av fargestoff oppløsning. Hensikten med enkle flekker er å avdekke størrelsen og formen til mikroorganismen. De enkle flekker som ofte brukes av mikrobiologer for rutinemessig blir fortynnet løsning av Carbol, krystallfiolett og metylenblått. metylenblått er oftest brukt enn noe annet sted i bakteriologi. Og "på grunn av sin sterke natur og beis kjerner og nukleinsyre granulater veldig intenst. Den metylenblått brukes for rask påvisning av bakteriepopulasjon av melken. Det er også brukt for diagnostisering av difteri. Dette flekken er integrert med eosin laktose agar for å skille den typiske E. coli i forurenset vann.

Den differensielle farging

I denne prosedyren, er mer enn ett fargestoff som brukes. differensialfarging prosedyren bidrar til å splitte bakterier inn i forskjellige grupper, basert på fargeegenskaper. De to viktigste differensial flekker som brukes av bakteriologer er Gramfarging og syrefast flekken.

Gram stain

Den enkle fargeprosedyre virker skjermen klart bakterier, men skiller ikke mellom lignende morfologi organismer. I 1884 har en dansk lege som het Christian Gram oppdaget en ny teknikk for å differensiere bakterier av lignende morfologi. Han har brukt to fargestoffer i rekkefølge, hvert av en annen farge. Organismene som beholder fargen av den første fargestoffet er kalt Gram positive og de som ikke kan opprettholde den første farge når det ble vasket med en avfarging løsning, men da det vil ta på fargen av det andre fargestoff kalles Gram-negativ. I denne fremgangsmåten blir den faste bakterie smøre underkastet følgende Regents farging rekkefølgen av sekvensen oppført nedenfor:
lilla krystall -> jod løsning -> alkohol (blekemiddel) --- > safranin.

prinsippet
De Gram-positive bakterier vil beholde den krystallfiolett og vises dyp lilla. De Gram-negative bakterier mister den lilla krystall på misfarging og teller farget med safranin og vises rødt. Oppløsning av jod anvendes som et beisemiddel å feste de primære eller flekk på et substrat for å kombinere med fargestoff for å danne en uoppløselig forbindelse-biting, for den første flekk.
Den nøyaktige virkningsmekanismen av denne farging teknikken er ikke klart forstått. Imidlertid er mer sannsynlige forklaringer for reaksjonene forbundet med strukturen og sammensetningen av celleveggen.
Celleveggene av Gram-negative bakterier er tynnere enn den for Gram-positive bakterier og inneholder en andel av lipid-innhold. Under farging av Gram-negative bakterier, ved behandling av alkoholen trekker lipid. Dette gir en økning av porøsiteten og permeabiliteten av celleveggen. Den krystallfiolett-jod-kompleks (-I CV), kan den trekkes ut og Gram-negative bakterier er bleket. Cellene deretter ta på fargen av safranin telleren flekken.
Celleveggene av gram-positive bakterier med et fettinnhold på mindre dehydrering under behandling alkohol. Porestørrelsen reduseres, permeabiliteten reduseres, og CV-I kompleks kan ikke trekkes ut. Derfor Gram-positive celler forblir fiolett fiolett.

endospores farging

endosporer trening er et karakteristisk trekk ved Bacillaceae familien, som inkluderer medlemmer av slekten aerobic og anaerob Bacillus slekten, Clostridium. Endospores tåle ugunstige miljøforhold som tørke, varme og dårlig inntak av næringsstoffer. Den endosporer er en meget trekkes tilbake legeme dannet i den vegetative bakteriecellen på et visst stadium av vekst. Størrelsen, formen og plasseringen av sporene er forholdsvis konstante karakteristikker av en gitt art og er derfor av en viss verdi for å skille den typen Bacillus fra en annen. Posisjonen til sporen i cellen kan være sentralt, sub-terminal eller klemme. Kan være den samme diameter av cellen, mindre eller større, forårsaker en svelling av cellen.
Endospores motstå sterkt bruk av enkle farger, men en farget tid er stille motstandsdyktig mot misfarging. Dette tegnet foreslår en måte å gjøre strukturen synlig. Hvis man bruker enkle flekker, er det bacillus legeme dypt farget, mens sporene unstained og fremstår som et lys område i kroppen. Med fargingsprosedyrer under kraftig farvestoffet kan innføres i spore substans. Når således farget, har en tendens til å opprettholde spore fargestoffet etter behandling med avfargende midler.

å gjøre klart skille mellom de sporer og den vegetative delen av cellen, er en teller kontrast flekken vanligvis brukt i en vanlig måte, og det resulterende bildet viser den opprinnelige flekken tatt fra sporer og andre stedet vises i cytoplasma. Så, er det det en meget enkel metode for å skille de endospores fra den vegetative celle.



Legg igjen en kommentar