Flekker røtter




Ved prøvetaking røtter for å detektere og / eller måle mengden av mycorrhizal kolonisering, er det viktig å velge den finere, mer fibrøse røtter. eldre røtter eller de fra planter med øyebolter eller andre grove røtter, kan ha noen mycorrhizae, men ususally kolonisering er dårlig, og består kun av hyfer som ofte er mer synlig utenfor røttene. For anlegg med en fibrøs rotsystem, deretter et tilfeldig utvalg nok. Mørkt pigmentert rot bør unngås bruk midler for å passere gjennom en fase med ytterligere bleke (inkubering ved 5% blekemiddel i 5-10 minutter er vanligvis tilstrekkelig, men dette må testes empirisk).

Etter grundig vasking for å fjerne alle partikler blir røttene plassert i plastbokser som brukes i medisin for behandlingen av biopsi vev. Ulike typer kassetter markedsføres (Fischer, Ted Pella, etc.), men det beste for rot prøvene er rektangulær form med 0,9 mm hull (bildet til høyre). Kassetter med større hull resultere i produksjon av røtter, spesielt når røttene kuttes opp i små fragmenter. Emballasje røtter fritt i kassetter (0,1-0,2 g max) for maksimal infiltrasjon av løsninger.



Røttene er blitt fjernet (fjerning av cytoplasmiske innholdet i cellene) med varm 10% KOH. Flere tilnærminger har blitt brukt, ved autoklavering kassetter i 5-10 minutter å koke i en beholder på laboratoriebenken. Mye avhenger av antall prøver som skal behandles samtidig. Vi vanligvis bare behandle 10-20 prøver på en gang. For å minimere omrøring, er preboil KOH inn i et stort begerglass på en Bunsen-brenner, og tilsett umiddelbart kassett når brenneren slås av. Inkubasjonstiden varierer med tykkelsen og skjørhet av røttene, men 10 minutter er vanligvis tilstrekkelig. Gamle tykkere røtter krever lengre inkubasjonstid. Bruning av løsningen er en indikasjon på kompensasjonsprosessen.

Siden de fleste av histologiske flekker som brukes for denne prosedyren er sure, er det avgjørende at røttene skal syrnet. Så vi vasker røtter (4 -5 x), og deretter dyppe båndene på 2% HCl i 15-20 minutter. For røtter fra sterkt sure jordsmonn, anbefales lengre inkubasjonstider. Hvis røttene er jevnt mørk og mycorrhizae er vanskelig å se, så utilstrekkelig kompensasjon er ofte årsaken.

Den samme prosedyren som beskrevet over for å fjerne røtter blir utført på nytt, bare direkte på andre flekker 0,05% blått eller annen passende (syrefuksin, chlorazol svart E). Flekken ble fremstilt ved å blande med vann, glyserin, og melkesyre på 1: 1: 1-forhold (v / v / v). Inkubasjonstiden varierer, men 3-4 minutter som fungerer best for oss med drivhusplanter. I bildet til høyre, ble båndene tilsatt til fargestoffoppløsning inneholdende røtter, varmet opp på en laboratoriebenk med en Bunsen-brenner, av brenneren når oppløsningen begynner å koke. Dette trinn kan utføres uten anvendelse av varme, men inkubasjonsperioden må derfor utvides til 12 timer.

Flekken er dekantert i en annen container (som kan brukes om igjen 1-2 ganger etter filtrering gjennom cheesecloth) eller forkastet i en wastebottle. Skyll kassetter med 4-5 endringer av vann og oppbevares ved 4 ° C i vannet. Mer kontrast mellom vev sopper og planteceller bakgrunn oppnås når prøvene ble lagret i vann i en uke eller mer i et kjøleskap (overskuddsfarge lekker fra røttene).

For langtids bevaring av farget røttene, setter vi dem i glassrør med en skrukork inneholdende en blanding av glycerol-vann (2: 1 v / v) med 1-2 dråper natriumazid 0,1% ved 4 ° C. Stain holdes i vevet sopp per> et år. Røttene kan lagres i fiksativ løsning samt (for eksempel formalin), men bare hvis du ønsker å kontrakt allergier, kreft eller andre mulige helseproblemer.

mycorrhizae farget med 0,05% syrefuksin som et alternativ sted

REFERANSER

Phillips, J. M. og D. S. Hayman. 1970. forbedret metode for å eliminere røttene og Mycorrhizal sopp flekker parasitter og vesikulær-arbuscular for en rask vurdering av infeksjon. Den britiske operasjonene Mykologisk Society 55: 158-161. (Classic Card)

Koske, R. E. og J. N. Gemma. 1989. En modifisert prosedyre for farging røtter å oppdage VA mycorrhizae. Mykologiske Forskning 92: 486-505.

McGonigle, T. P., M. H. Miller, D. G. Evans, G. L. Fairchild og J. A. Swan. 1990. En ny metode, som gir et objektivt mål på rot kolonisering av vesikulær-arbuscular Mycorrhizal sopp. New Phytologist 15: 490-501.




Legg igjen en kommentar