Zombie lilla ™ survival kit løsbar - BioLegend




Standard farging protokoll celler:
1. Vask cellene med PBS-buffer (Tris-buffer og noe fritt protein). 2. Fortynn
dye Zombie Violet ™ 1: 100-1000 i PBS. Suspender 1-10 x 106 celler i 100 ul fortynnet Zombie Violet ™ løsning. For å minimalisere bakgrunnsfarging av levende celler, holder mengden av fargestoff og / eller antallet av celler pr 100 mikroliter for optimal ytelse. Forskjellige typer av celler kan ha en stor grad av misfarging variasjon basert på størrelsen av cellene, og graden av celledød.
Merk: ikke bruke Tris buffer som fortynningsmiddel og være sikker på at PBS ikke inneholder noe annet protein, slik som BSA eller FBS.
Merk: Mengden av fargestoff som benyttes kan også påvirke evnen til å detektere apoptotiske celler, og lever og død.
4. Inkuber cellene ved romtemperatur, i mørke, i 15-30 minutter.
5. Vask en gang med 2 ml av celle farving BioLegend Buffer (katalog nr. 420201) eller tilsvarende buffer som inneholder serum eller BSA.
6. Fortsett farging prosedyre for gjennomføring av antistoffene som ønsket.
7. Cellene kan festes med paraformaldehyde eller metanol før permeabilization eller kan analyseres uten fiksering.


No-vask sekvensiell Farging Protokoll:

1. Vask cellene med PBS-buffer (Tris-buffer og noe fritt protein).
2. bestemme det totale volum av ml av antistoff cocktails tidligere titrert og optimalisert for den analyse som vil bli lagt til hver ampulle / brønn av celler i henhold til et sluttvolum på 100 ul. Trekke dette volum fra det totale volumet av antistoffarging 100 mikroliter tiltenkte dosering. I rest volum, fortynn Zombie Violet ™ fargestoff i 1: 100 til 1000 i PBS som bestemt ved optimaliseringen før i det volum. For eksempel, hvis du legger til 20 liter cocktail av antistoffer mot et totalt volum på 100 ml flekker, bruke 80 ml av zombie Violet ™ løsning. Resuspender 1-10 x 106 celler i passende volum av den Zombie Violet ™ løsning. Forskjellige typer av celler kan ha en stor grad av misfarging variasjon basert på størrelsen av cellene, og graden av celledød.
Merk: ikke bruke Tris buffer som fortynningsmiddel og være sikker på at PBS ikke inneholder noe annet protein, slik som BSA eller FBS.
Merk:
Mengden av fargestoff som benyttes kan også påvirke evnen til å detektere apoptotiske celler, og lever og død.
3. Inkuber i 10-15 minutter ved romtemperatur, beskyttet mot lys. Uten vasking av cellene, tilsett Antistoffblandingen overflaten av cellene og inkubert i ytterligere 15-20 minutter.
4. Tilsett 1-2 ml cellebuffer (farge Cat. No. 420 201) eller tilsvarende buffer inneholdende BSA eller serum. Pellet sentrifuge.
5. Fortsett med normal fiksering og permeabilization prosedyre. Hvis du planlegger å hoppe over innstillingen og analysere levende celler, fullføre en fase med ekstra vask for å minimere unødvendige bakgrunn av levende celler.

notater: Hvis celletype i bruk ikke kan tåle et miljø fritt for proteiner, og deretter titrere Zombie Violet ™ fargestoff i nærvær av den samme mengde av BSA / serum som vil være til stede i antistoffet fargeprosedyre. En større mengde av Zombie Violet ™ kan være nødvendig siden den BSA / serum reagerer med og binder viss andel av den Zombie Violet ™.
fargestoff
Zombie Violet ™ er begeistret av fiolett laser (405 nm) og har et utslipp maksimalt 423 nm fluorescens. Hvis man bruker en flerfarge panelet kan filterkonstruksjon optimalisering være nødvendig avhengig av andre fluoroforer som brukes. fargestoff Zombie Violet ™ har utslipp som ligner på Brilliant Violet 421 ™ og Pacific Blue ™.


Legg igjen en kommentar